El médico puede solicitar la prueba cuando: se presentan síntomas como un chancro (úlcera) en genitales o garganta, se está realizando tratamiento por otra enfermedad de transmisión sexual como la gonorrea, en el embarazo, ya que una sífilis no tratada puede infectar e incluso provocar la muerte del feto en desarrollo, se presentan síntomas no específicos parecidos a los de la sífilis, con el objetivo de averiguar la causa exacta de la enfermedad.

La determinación se realiza a partir de una muestra de sangre venosa. Se recomienda que para la realización de este análisis el paciente se presente al laboratorio con un periodo de ayuno de 8 horas.